麦类作物学报

作者：王巧慧，谷建华，郭欢，吕士凯，吉万全,张宏

单位：1.西北农林科技大学农学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌　712100； 2.陕西省留坝县种子管理站,陕西留坝　724100

关键词：白粉菌,小麦,cDNA文库,酵母双杂交,HSP40-70,

基金：国家自然科学基金项目（31971941）

为解析白粉病菌侵染小麦以及小麦防御的分子机制，以抗白粉病种质N9134为材料，剪取白粉病菌（Blumeria graminis f.sp.tritici,Bgt）接种48 h后的叶片，提取总RNA，利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA（ds-cDNA），并进行均一化处理和SfiI酶切处理，处理后的ds-cDNA分别连接pGADT7-SfiI三框载体，将连接产物转化至感受态细胞HST08中构建文库。通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率，最后收集细菌并提取质粒。经鉴定，该文库库容量大于1.0×106 cfu·mL-1，插入片段主要分布在 400～2 000 bp之间，重组率为100%，冗余度为3%。利用酵母双杂交系统筛选cDNA文库，获得2个与热休克蛋白HSP40-70互作的蛋白质，分别为DnaJ类蛋白（DnaJ-like）和E3泛素蛋白连接酶AIP2（AIP）。综上表明，文库构建质量较好，为后续筛选抗逆关键基因奠定了基础。

来源：2021年第2期

《麦类作物学报》期刊编辑部

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